Определение количества и функциональных свойств вирус-специфических Т-лимфоцитов (ВСТ) в донорских клеточных продуктах является важным фактором прогнозирования иммунореконституции и планирования противовирусной терапии у реципиентов после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. CD45RA-деплетированные продукты донорских лимфоцитов широко используются для профилактики и лечения вирусных инфекций, однако влияние длительного криохранения на функциональное состояние ВСТ остается недостаточно изученным.
В исследование включены образцы мононуклеарных клеток периферической крови 16 доноров и образцы их CD45RA-деплетированных фракций: свежие продукты, размороженные после 2–4 недель, 5 и 7 лет криохранения. Количество ВСТ, специфичных к цитомегаловирусу (CMV), вирусу Эпштейна–Барр (EBV) и аденовирусу (ADV), определяли методом ELISpot из расчета на 300 000 мононуклеарных клеток в образце.
Перед исследованием CD45RA-деплетированных продуктов проводили клеточный рестинг – клетки культивировали в течение 18 часов в среде CTL-Test Medium.
Для CD45RA-деплетированных продуктов как до криоконсервации, так и после размораживания без этапа рестинга характерна крайне низкая выявляемость ВСТ, несмотря на высокую частоту обнаружения этих клеток в периферической крови тех же доноров.
После проведения рестинга выявляемость ВСТ восстанавливалась как в свежих, так и в размороженных CD45RA-деплетированных образцах. Криохранение в течение 5 лет сопровождалось выраженным снижением выявляемости CMV-, EBV- и ADV-специфичных клеток.
При увеличении срока криохранения до 7 лет наблюдалось дальнейшее снижение выявляемости ADV- и EBV-специфичных лимфоцитов, тогда как уровень CMV-специфичных лимфоцитов не сопровождался столь выраженными изменениями.
Проведение ELISpot-анализа перед клиническим применением CD45RA-деплетированных образцов после криоконсервации позволяет оценить функциональную активность патоген-специфических клеток. Для достоверного определения содержания ВСТ в CD45RA-деплетированных продуктах необходимо культивирование клеток в течение 18 часов в бессывороточной среде перед проведением исследования методом ELISpot.