Эффективность химиотерапии определяется процентом опухолевых клеток, подвергшихся гибели, а также отсутствием рецидива опухоли. Ключевое влияние на эти процессы оказывает регулятор клеточного цикла белок р21, роль которого до сих пор неоднозначна в контексте противоопухолевой терапии.
Определить влияние уровня экспрессии гена белка р21 (CDKN1A) до и после воздействия на опухолевые клетки доксорубицином на эффективность терапии.
Для анализа распределения клеток по фазам клеточного цикла использовали проточную цитометрию. Оценку изменения активности фермента β-галактозидазы проводили с помощью иммуноцитохимического окрашивания клеток. Изменение уровня белков определяли методом вестерн-блоттинга. Для визуализации колоний применяли окрашивание клеток кристаллическим фиолетовым.
Гиперэкспрессия гена CDKN1A при воздействии на клетки доксорубицином приводит к снижению количества клеток, остановивших свое деление на стадии G2/M клеточного цикла, и к увеличению популяции клеток в стадии G1. При условии отсутствия экспрессии этого гена в дальнейшем происходит возобновление пролиферации.
Отсутствие белка р21 при воздействии химиопрепаратом является значительное увеличение процента клеток в стадии G2/M с их последующей гибелью. Индукция экспрессии гена CDKN1A после прекращения воздействия доксорубицином или на протяжении всего эксперимента приводит к развитию стадии клеточного старения.
Повышенная экспрессия гена CDKN1A во время воздействия на опухолевые клетки доксорубицином снижает эффективность последнего. Поддержание высокого уровня р21 после прекращения воздействия препаратом способствует развитию фенотипа клеточного старения, что может иметь важные клинические последствия для планирования противоопухолевой терапии.